رسالت انجمن

رسالت انجمن ایجاد فضایی برای تبادل اندیشه و آرای اندیشمندان، ارتقای سطح علمی پژوهشگران و متخصصان و نیز آشنا کردن عموم مردم با پیشرفت های دانش تخصصی با زبان ساده می باشد .

ما در شبکه های اجتماعی

پیشینه ی ساخت دستگاه فلوسایتومتری به سال ۱۹۳۴ میلادی بر می گردد. مروری بر فلوسایتومتری

 | تاریخ ارسال: ۱۳۹۸/۳/۲۸ | 
پیشینه ی ساخت دستگاه فلوسایتومتری به سال ۱۹۳۴ میلادی بر می گردد، جایی که دانشمندی به نام Andrew Moldavan پیشنهاد ساخت میکروسکوپی را داد که در آن سلول هایی که در یک محلول قرار دارد به صورت تکی از مقابل لنز عبور می کنند و سیگنال ساطع شده از آن سلول توسط شناساگر آنالیز می شود. اما پس از آن و در دهه ی ۶۰ میلادی، تغییر و تحولاتی که در طراحی کلی ساخته های قبلی صورت گرفت موجب به ساخت دستگاه فلوسایتومتری به شیوه ی امروزی شد.
کار با دستگاه فلوسایتومتری نیاز به محلولی از سلول ها دارد که این محلول در مخزن دستگاه جریان پیدا میکند و هر سلول با عبور از مقابل لیزر مورد شناسایی و آنالیز قرار بگیرد. دستگاه فلوسایتومتری دارای یک یا چند منبع نور است ( شکل) که برای برانگیختن فلورسنت متصل به سلول استفاده می شود. رایج ترین منبع لیزر که در دستگاه های فلوسایتومتری استفاده می شود لیزر آبی رنگ “آرگون” است. اما لیزر های دیگر مانند لیزر هلیوم-نئون قرمز رنگ نیز مورد استفاده قرار می گیرد.


 

 
برخی از کاربردهای مهم تکنیک فلوسایتومتری:
در ادامه به برخی از کاربردهای رایج فلوسایتومتری اشاره میشود.
  • اندازه گیری سایز و گرانولیتی
هنگامی که لیزر به سلول بر خورد می کند، یک قسمتی از آن در امتداد سطح و لبه های سلول ساطع می شود که این می تواند معیاری از اندازه ی سلول باشد که به آن Forward scatter (FSc) و یا Forward angle light scatter (FALS)  می گویند. بنابراین هنگام خوانش نمونه با فلوسایتومتری، سلولی که ولتاژ FSc بیشتری داشته باشد، ابعاد بزرگتری دارد.
 
  علاوه بر FSc، لیزر تابانده شده به سلول می تواند میزان پیچیدگی ساختاری درون سلول را نیز اندازه گیری کند که به آن Side scatter (SSc) و یا Right-angle light scatter (RALS) و یا ۹۰ degree light scatter (90LS) می گویند. عبارت ۹۰ درجه به این دلیل است که شناساگر این نوع امواج در زاویه ی ۹۰ درجه ای منبع لیزر قرار دارد. این یکی از روش های اندازه گیری میزان گرانول های درون سلول است. به همین دلیل میزان ولتاژ SSc گرانولوسیت های خون بالاتر از لنفوسیت های آن است
پس از آن نور لیزر توسط آیینه هایی که در سر راه هر شناساگر قرار دارند به سمت شناساگر هدایت می شوند. 

 
سپس این شناساگرها امواج نور را به سیگنال های الکتریکی تبدیل می کنند. اساس کار فلوسایتومتری دقیقا در این نقطه قرار دارد. اگر سلول ها را هنگام آماده سازی با پروب های فلورسنت که معمولا آنتی بادی هایی اختصاصی علیه آنتی ژن های سلول می باشد رنگ آمیزی کنیم، هنگام برخورد با لیزر طول موج دیگری ساطع می کنند که توسط شناساگر تشخیص داده شده و نتیجه کار به صورت گراف های مختلفی بر روی مانیتور ظاهر می گردد.
 
سایر مقالات  
  • ایمونوفنوتایپینگ :
آنتی ژن ها نوعی پروتئین هستند که به طور عمده در سطح، سیتوپلاسم و هسته قرار دارند. اگر آنتی ژن ها را با آنتی بادی های اختصاصی رنگ آمیزی کرده و فلروکروم متصل شده به این آنتی بادی ها قابلیت برانگیخته شدن و دریافت نشر توسط دستگاه را داشته باشند در انتهای آزمایش می توانیم به راحتی میزان درصد وجود آن آنتی ژن را در سلول متوجه شویم. این کاربرد که به نام ایمونوفنوتایپینگ معروف است در آزمایشات تشخیص کلینیکی، تحقیقاتی کاربرد فراوانی دارد. شکل زیر جمعیت سلولی T CD4+  را در بین لنفوسیت های T به نمایش دراورده است.
  • میزان مرگ و میر سلولی:
سلول ها یا به طور برنامه ریزی شده و یا به صورت عوامل محیطی مانند مکانیکی وشیمیایی که به ترتیب به نام آپپتوز و نکروز شناخته می شوند، دچار مرگ می شوند. تشخیص مرگ و میر سلولی و تفکیک بین این نوع مرگ در بسیاری از آزمایشات پر اهمیت است. این دو نوع مرگ به راحتی و در عرض کمتر از ۳۰ دقیقه توسط این تکنیک با یک روش مناسب رنگ آمیزی مشخص می شوند.
 
  • بررسی میزان ماده ژنتیکی در سلول:
از دیگر کاربردهای تکنیک فلوسایتومتری میتوان به کاربرد آن در تعیین میزان ماده ژنتیکی در سلول اشاره کرد .تمامی سلولهای جانوری و گیاهی برای بقا نیازمند انجام فرایند تکثیر هستند.سلولهای درحال تقسیم  باید چرخه سلولی که شامل G2،S، G1 و میتوز است را طی کنند تا به بتوانند زنده بمانند و تکثیر شوند. بررسی اینکه سلول در کدام فاز از چرخه سلولی است و یا حتی به چه میزانی توسط این تکنیک قابل بررسی می باشد. در این حالت از فلوکرومی که  قابلیت اتصال به  DNA  سلولی را دارند ( ازجمله PI و DAPI) استفاده میشود. در این حالت فرض بر این است که در مرحله S   از چرخه سلولی، محتویات DNA سلول بیشتر از مرحله G1 است؛ بنابراین رنگ بیشتری به خود جذب میکنند؛ شکل زیر نمونه ای از نمودار نهایی آنالیز چرخه سلول را نشان میدهد.
  • بررسی میزان تکثیر سلولی:
اهمیت تکثیر سلولی به گونه ای است که بسیاری از فلروکروم های اختصاصی برای نشان دادن میزان تکثیر وجود دارند.بررسی میزان تکثیر از جمله کاربردهای مهم این تکنیک بوده که به راحتی توسط دیگر تکنیک ها قابل انجام نیست اما با تکنیک فلوسایتومتری می توان به راحتی میزان تکثیر سلولی را در نسل های مختلف نشان داد. در این روش از رنگ حیاتی CFSE که قابلیت ورود به سلولهای زنده را دارد استفاده میکنند، در هربار تقسیم شدن سلول میزان این رنگ بین سلولهای دختری تقسیم میشود، بنابراین، رقیق شدن رنگ نشلن دهنده تکثیر سلولی است، شکل زیر این روش را به صورت شماتیک نشان میدهد:


گرداوری کننده:
دکتر مریم عظیمی
دکتری تخصصی ایمونولوژی

 

کلیدواژه ها: فلوسایتومتری | ایمونولوژی | تشخیص |



CAPTCHA
دفعات مشاهده: 1239 بار   |   دفعات چاپ: 94 بار   |   دفعات ارسال به دیگران: 0 بار   |   0 نظر


کلیه حقوق این وب سایت متعلق به انجمن ایمونولوژی و آلرژی ایران می باشد.

طراحی و برنامه نویسی : یکتاوب افزار شرق

© 2015 All Rights Reserved | Iranian Society for Immunology and Allergy

Designed & Developed by : Yektaweb